Introducere.
Cum funcționează cromatografia în strat subțire?
Pregătire.
Realizarea cromatogramei.
Luați un borcan de plastic sau sticlă, turnați 10-15 ml de apă, 4-5 picături de soluție alcoolică de iod. Se amestecă timp de 7-10 minute. Se scurge apa. Iodul este precipitat în apă pe părțile laterale ale borcanului. Se pune acest borcan în recipient.
Factorul de retenție
După ce o separare este completă, compușii individuali apar ca pete separate vertical. Fiecare pată are un factor de retenție (Rf) care este egal cu distanța migrată raportată la distanța totală parcursă de solvent. Formula Rf este Rf= distanța parcursă de probă/distanța parcursă de solvent.
Valoarea Rf poate fi utilizată pentru identificarea compușilor datorită unicității lor pentru fiecare compus. Atunci când se compară doi compuși diferiți în aceleași condiții, compusul cu valoarea Rf mai mare este mai puțin polar deoarece nu aderă la faza staționară la fel de mult ca compusul polar, care ar avea o valoare Rf mai mică. Valorile Rf și reproductibilitatea pot fi afectate de o serie de factori diferiți, cum ar fi grosimea stratului, umiditatea de pe placa TLC, saturația vasului, temperatura, adâncimea fazei mobile, natura plăcii TLC, dimensiunea probei și parametrii solventului. Aceste efecte determină în mod normal o creștere a valorilor Rf. Cu toate acestea, în cazul grosimii stratului, valoarea Rf ar scădea deoarece faza mobilă se deplasează mai lent în sus pe placă.
Discutarea rezultatelor
Metamfetamină - 0,55
Mefedronă - 0,65
În concluzie.
Cromatografia este utilizată pentru a separa amestecurile de substanțe în componentele lor. Toate formele de cromatografie funcționează pe baza aceluiași principiu. În acest articol, voi explica această metodă prin definirea Rf al amfetaminei metamfetamina și mefedronei.
Plăcile cromatografice au o fază staționară (un solid sau un lichid sprijinit pe un solid) și o fază mobilă (un lichid sau un gaz). Faza mobilă curge prin faza staționară și transportă cu ea componentele amestecului. Diferitele componente se deplasează cu viteze diferite. Motivele pentru acest lucru vor fi analizate mai jos. Cromatografia în strat subțire se realizează exact așa cum se spune - folosind un strat subțire și uniform de gel de siliciu sau alumină acoperit pe o bucată de sticlă, metal sau plastic rigid. Gelul de siliciu (sau alumina) este faza staționară. Faza staționară pentru cromatografia în strat subțire conține adesea și o substanță fluorescentă în lumină UV sau o cameră de iod - din motive pe care le veți vedea mai târziu. Faza mobilă este un solvent lichid adecvat sau un amestec de solvenți.
Plăcile cromatografice au o fază staționară (un solid sau un lichid sprijinit pe un solid) și o fază mobilă (un lichid sau un gaz). Faza mobilă curge prin faza staționară și transportă cu ea componentele amestecului. Diferitele componente se deplasează cu viteze diferite. Motivele pentru acest lucru vor fi analizate mai jos. Cromatografia în strat subțire se realizează exact așa cum se spune - folosind un strat subțire și uniform de gel de siliciu sau alumină acoperit pe o bucată de sticlă, metal sau plastic rigid. Gelul de siliciu (sau alumina) este faza staționară. Faza staționară pentru cromatografia în strat subțire conține adesea și o substanță fluorescentă în lumină UV sau o cameră de iod - din motive pe care le veți vedea mai târziu. Faza mobilă este un solvent lichid adecvat sau un amestec de solvenți.
Silica gel este o formă de dioxid de siliciu (siliciu). Atomii de siliciu sunt uniți prin intermediul atomilor de oxigen într-o structură covalentă uriașă. Cu toate acestea, la suprafața gelului de siliciu, atomii de siliciu sunt legați de grupe -OH. Astfel, la suprafața gelului de silice, există legături Si-O-H în loc de legături Si-O-Si. Diagrama prezintă o mică parte a suprafeței siliciului. Suprafața gelului de siliciu este foarte polară și, datorită grupelor -OH, poate forma legături de hidrogen cu compușii adecvați din jurul său, precum și forțe de dispersie Van-der-Waals și atracții dipol-dipol.
Aveți nevoie de:
1. Seringă pentru 5 ml х 4
2. Borcan de plastic pentru testul de urină х 4
3. Recipiente mari de plastic pentru alimente (sau un pahar mare și un recipient de plastic) х 2
4. Placă TLC cu strat de silicagel 5x10 cm (o puteți tăia pe cea mare cu foarfeca)
5. Solvenți acetat de etil, metanol, hexan (poate fi înlocuit cu tetraclorură de carbon), soluție apoasă de amoniac 10% sau mai mare, soluție alcoolică de iod
6. Creion moale, riglă și clește
Nu uitați de mănuși și aparatul de respirat, asigurați experimentul într-o încăpere ventilată.
1. Seringă pentru 5 ml х 4
2. Borcan de plastic pentru testul de urină х 4
3. Recipiente mari de plastic pentru alimente (sau un pahar mare și un recipient de plastic) х 2
4. Placă TLC cu strat de silicagel 5x10 cm (o puteți tăia pe cea mare cu foarfeca)
5. Solvenți acetat de etil, metanol, hexan (poate fi înlocuit cu tetraclorură de carbon), soluție apoasă de amoniac 10% sau mai mare, soluție alcoolică de iod
6. Creion moale, riglă și clește
Nu uitați de mănuși și aparatul de respirat, asigurați experimentul într-o încăpere ventilată.
Realizarea cromatogramei.
1. Trebuie să pregătiți o soluție fluentă acetat de etil:metanol:soluție de amoniac 85:10:5. Pentru 10 ml trebuie să luați 8,5 ml de acetat de etil, 1 ml de metanol și 0,5 ml de soluție de amoniac și să le amestecați.
2. Curățați placa cu gel de siliciu cu această soluție. Puneți placa în soluție, trebuie să fie la o adâncime de 3-4 mm în paharul mare (ca în fig.1). Puteți folosi o pensetă pentru manipulări confortabile. Important: nu udați placa cu apă pentru că se va strica. Trebuie să mențineți placa în soluție până când partea din față a solventului ajunge până la marginea superioară a plăcii.
3. Vom începe cu un caz simplu. Există patru substanțe: amfetamină(A), metamfetamină(L), cafeină(K) și mefedronă(M).
Pentru acest experiment, trebuie să obțineți o bază liberă de droguri. Puneți 10-15 mg de probă (câteva bulgări) într-un borcan de sticlă (plastic), pur două picături de soluție apoasă de amoniac. Apoi, turnați 3-4 picături de hexan sau tetraclorură de carbon și agitați un minut. Baza liberă a medicamentului dumneavoastră este diluată în stratul organic.4. Acum trebuie să o așezați pe placa de cromatografie, care a fost pregătită mai devreme. Luați un ac de la o seringă și tăiați-l cu un clește, ca în exemplu. Trebuie să obțineți o margine plată.
Luați o placă curată și uscată și trasați o linie cu creionul la ~5-6 mm în sus de marginea inferioară. Orice etichetare pe placă pentru a arăta poziția inițială a picăturii trebuie să fie, de asemenea, în creion. În cazul în care acest lucru a fost făcut cu cerneală, coloranții din cerneală se vor deplasa, de asemenea, pe măsură ce se dezvoltă cromatograma. Marcați patru puncte cu distanțe egale între ele. Imersați capătul acului tăiat în stratul organic al primei soluții narcotice. Atingeți placa cu vârful acului și faceți o mică pată cu diametrul de 3-4 mm, așteptați până se usucă, repetați procedura de 10 ori. Se repetă etapele 2, 3 pentru alte substanțe.
Greșeală frecventă: nu faceți pete mari de grăsime, deoarece substanța dumneavoastră se poate suprapune peste alte substanțe în timpul experimentului.
5. Când petele de baze libere sunt uscate, placa se plasează într-un strat puțin adânc de solvent într-un pahar acoperit. Este important ca nivelul solventului să se afle sub linia cu pata de pe el. Se așteaptă până când linia frontală a solventului ajunge la 4-5 mm înaintea marginii superioare a plăcii și se scoate. După aceea, trasați o linie cu creionul pe linia frontală a solventului. Uscați-o la aer.
6. Cromatograma plasată într-un recipient închis (cum ar fi un alt pahar de laborator acoperit cu o sticlă de ceas sau recipiente mari de plastic) împreună cu câteva cristale de iod. Vaporii de iod din recipient reacționează cu petele de pe cromatogramă. Substanțele care vă interesează pot apărea sub formă de pete colorate. Trasați-le cu un creion și desenați puncte în centrul fiecărei pete.
De asemenea, puteți utiliza lampa UV cu lungimea de undă de 254 și 365 nm.
Cum se pregătește camera de iod.Greșeală frecventă: nu faceți pete mari de grăsime, deoarece substanța dumneavoastră se poate suprapune peste alte substanțe în timpul experimentului.
5. Când petele de baze libere sunt uscate, placa se plasează într-un strat puțin adânc de solvent într-un pahar acoperit. Este important ca nivelul solventului să se afle sub linia cu pata de pe el. Se așteaptă până când linia frontală a solventului ajunge la 4-5 mm înaintea marginii superioare a plăcii și se scoate. După aceea, trasați o linie cu creionul pe linia frontală a solventului. Uscați-o la aer.
Luați un borcan de plastic sau sticlă, turnați 10-15 ml de apă, 4-5 picături de soluție alcoolică de iod. Se amestecă timp de 7-10 minute. Se scurge apa. Iodul este precipitat în apă pe părțile laterale ale borcanului. Se pune acest borcan în recipient.
Factorul de retenție
După ce o separare este completă, compușii individuali apar ca pete separate vertical. Fiecare pată are un factor de retenție (Rf) care este egal cu distanța migrată raportată la distanța totală parcursă de solvent. Formula Rf este Rf= distanța parcursă de probă/distanța parcursă de solvent.
În cadrul experimentului am obținut trei pete în loc de cele patru așteptate. Repetarea experimentului arată că cafeina nu este eluată de soluția de cetat de etil:metanol:amoniac 85:10:5. Experimentul a demonstrat că această soluție este adecvată pentru eluarea unor droguri precum amfetamina, metamfetamina și mefedrona.
Rf al drogurilor studiate.
Amfetamină - 0,53Metamfetamină - 0,55
Mefedronă - 0,65
Explicație.
Am două plăci cu rezultate. Două distanțe măsurate între punctul de *****ire și mijlocul petei încercuite. Punctul de amfetamină a fost la 42 mm în prima placă și la 49 mm în a doua placă de la linia de start, linia frontală a solventului a fost la 85 și respectiv 86 mm. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Apoi am calculat media aritmetică 0,53. Aceleași calcule au fost făcute și pentru alte substanțe.
Am două plăci cu rezultate. Două distanțe măsurate între punctul de *****ire și mijlocul petei încercuite. Punctul de amfetamină a fost la 42 mm în prima placă și la 49 mm în a doua placă de la linia de start, linia frontală a solventului a fost la 85 și respectiv 86 mm. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Apoi am calculat media aritmetică 0,53. Aceleași calcule au fost făcute și pentru alte substanțe.
În concluzie.
După cum arată experimentul, puteți măsura Rf al medicamentului dvs. și puteți compara cu substanța cunoscută în aceeași placă. Faceți o pată de bază fără medicamentul dvs. și 1-4 pete de alte medicamente pentru a verifica Rf. Dacă petele se află la aceeași distanță de linia de *****ire, atunci probabil că este vorba de aceeași substanță. De asemenea, dacă obțineți mai multe pete de la medicamentul dumneavoastră, probabil că aveți un amestec de substanțe. Unele medicamente au mai multe pete deoarece sunt un amestec de medicament și subproduse de sinteză. Cu toate acestea, le puteți compara cu alte medicamente utilizând cromatografia în strat subțire.
Attachments
Last edited by a moderator:
