Introdução.
Como funciona a cromatografia em camada fina?
Preparação.
Produção do cromatograma.
Pegue um frasco de plástico ou vidro, despeje 10-15 ml de água, 4-5 gotas de solução de álcool iodado. Mexa por 7 a 10 minutos. Escorra a água. O iodo é precipitado na água nas laterais do frasco. Coloque esse frasco em um recipiente.
Fator de retenção
Após a conclusão de uma separação, os compostos individuais aparecem como pontos separados verticalmente. Cada ponto tem um fator de retenção (Rf) que é igual à distância migrada sobre a distância total coberta pelo solvente. A fórmula do Rf é Rf= distância percorrida pela amostra/distância percorrida pelo solvente.
O valor de Rf pode ser usado para identificar compostos devido à sua exclusividade para cada composto. Ao comparar dois compostos diferentes sob as mesmas condições, o composto com o valor Rf maior é menos polar porque não adere à fase estacionária por tanto tempo quanto o composto polar, que teria um valor Rf menor. Os valores de Rf e a reprodutibilidade podem ser afetados por vários fatores diferentes, como espessura da camada, umidade na placa de TLC, saturação do recipiente, temperatura, profundidade da fase móvel, natureza da placa de TLC, tamanho da amostra e parâmetros do solvente. Esses efeitos normalmente causam um aumento nos valores de Rf. Entretanto, no caso da espessura da camada, o valor de Rf diminuiria porque a fase móvel se move mais lentamente pela placa.
Discussão dos resultados
Metanfetamina - 0,55
Mefedrona - 0,65
Conclusão.
A cromatografia é usada para separar misturas de substâncias em seus componentes. Todas as formas de cromatografia funcionam com o mesmo princípio. Neste artigo, explicarei esse método definindo o Rf da anfetamina, metanfetamina e mefedrona.
As placas de cromatografia têm uma fase estacionária (um sólido ou um líquido apoiado em um sólido) e uma fase móvel (um líquido ou um gás). A fase móvel flui através da fase estacionária e carrega consigo os componentes da mistura. Componentes diferentes viajam em taxas diferentes. Veremos os motivos disso mais adiante nesta página. A cromatografia de camada fina é feita exatamente como diz o nome - usando uma camada fina e uniforme de sílica gel ou alumina revestida em um pedaço de vidro, metal ou plástico rígido. O gel de sílica (ou a alumina) é a fase estacionária. A fase estacionária da cromatografia em camada fina também contém, com frequência, uma substância que fluoresce à luz UV ou à câmara de iodo, por motivos que você verá mais adiante. A fase móvel é um solvente líquido adequado ou uma mistura de solventes.
As placas de cromatografia têm uma fase estacionária (um sólido ou um líquido apoiado em um sólido) e uma fase móvel (um líquido ou um gás). A fase móvel flui através da fase estacionária e carrega consigo os componentes da mistura. Componentes diferentes viajam em taxas diferentes. Veremos os motivos disso mais adiante nesta página. A cromatografia de camada fina é feita exatamente como diz o nome - usando uma camada fina e uniforme de sílica gel ou alumina revestida em um pedaço de vidro, metal ou plástico rígido. O gel de sílica (ou a alumina) é a fase estacionária. A fase estacionária da cromatografia em camada fina também contém, com frequência, uma substância que fluoresce à luz UV ou à câmara de iodo, por motivos que você verá mais adiante. A fase móvel é um solvente líquido adequado ou uma mistura de solventes.
A sílica gel é uma forma de dióxido de silício (sílica). Os átomos de silício são unidos por átomos de oxigênio em uma estrutura covalente gigante. Entretanto, na superfície do gel de sílica, os átomos de silício estão ligados a grupos -OH. Portanto, na superfície do gel de sílica, há ligações Si-O-H em vez de ligações Si-O-Si. O diagrama mostra uma pequena parte da superfície da sílica. A superfície do gel de sílica é muito polar e, devido aos grupos -OH, pode formar ligações de hidrogênio com compostos adequados ao seu redor, bem como forças de dispersão de Van-der-Waals e atrações dipolo-dipolo.
Você precisa de:
1. Seringa para 5 ml х 4
2. Frasco plástico para teste de urina х 4
3. Recipientes grandes de plástico para alimentos (ou um béquer grande e um recipiente de plástico) х 2
4. Placa TLC com camada de sílica gel de 5x10 cm (você pode cortar uma grande com uma tesoura)
5. Solventes acetato de etila, metanol, hexano (pode ser substituído por tetracloreto de carbono), solução aquosa de amônia a 10% ou mais, solução de álcool iodado
6. Lápis macio, régua e alicate
Não se esqueça das luvas e do respirador, faça o experimento em uma sala ventilada.
1. Seringa para 5 ml х 4
2. Frasco plástico para teste de urina х 4
3. Recipientes grandes de plástico para alimentos (ou um béquer grande e um recipiente de plástico) х 2
4. Placa TLC com camada de sílica gel de 5x10 cm (você pode cortar uma grande com uma tesoura)
5. Solventes acetato de etila, metanol, hexano (pode ser substituído por tetracloreto de carbono), solução aquosa de amônia a 10% ou mais, solução de álcool iodado
6. Lápis macio, régua e alicate
Não se esqueça das luvas e do respirador, faça o experimento em uma sala ventilada.
Produção do cromatograma.
1. É preciso preparar uma solução fluente de acetato de etila: metanol: amônia 85:10:5. Para 10 ml, é necessário tomar 8,5 ml de acetato de etila, 1 ml de metanol e 0,5 ml de solução de amônia e misturá-los.
2. Limpe a placa com sílica gel com essa solução. Coloque a placa na solução, que deve ter de 3 a 4 mm de profundidade em um béquer grande (como na figura 1). Você pode usar uma pinça para fazer uma manipulação confortável. Importante: não molhe a placa com água, pois ela se estragará. Você deve manter a placa na solução até que a frente do solvente chegue à borda superior da placa.
3. Começaremos com um caso simples. Há quatro substâncias: anfetamina(A), metanfetamina(L), cafeína(K) e mefedrona(M).
Para este experimento, você precisa obter uma base livre de drogas. Coloque de 10 a 15 mg da amostra (alguns pedaços) em um frasco de vidro (plástico), com duas gotas de solução aquosa de amônia pura. Em seguida, despeje 3-4 gotas de hexano ou tetracloreto de carbono e agite por um minuto. A base livre de seu medicamento é diluída na camada orgânica.
de base livre
4. Agora você precisa colocá-la na placa de cromatografia, que foi preparada anteriormente. Pegue uma agulha de uma seringa e corte-a com um alicate, como no exemplo. Você precisa obter uma borda plana.
Pegue uma placa limpa e seca e desenhe uma linha a lápis de 5 a 6 mm acima da borda inferior. Qualquer marcação na placa para mostrar a posição original da gota também deve ser feita a lápis. Se tudo isso tiver sido feito com tinta, os corantes da tinta também se moverão com o desenvolvimento do cromatograma. Marque quatro pontos com a mesma distância entre eles. Mergulhe a extremidade da agulha cortada na camada orgânica da primeira solução narcótica. Toque a placa com a ponta da agulha e faça um pequeno ponto de 3 a 4 mm de diâmetro, aguarde até que seque e repita o procedimento 10 vezes. Repita os estágios 2 e 3 para outras substâncias.
Erro comum: não faça uma grande mancha de gordura, pois sua substância pode se sobrepor a outras substâncias durante o experimento.
5. Quando as manchas de bases livres estiverem secas, a placa é colocada em uma camada rasa de solvente em um béquer coberto. É importante que o nível do solvente esteja abaixo da linha com a mancha. Aguarde até que a linha de frente do solvente atinja 4-5 mm antes da borda superior da placa e puxe-a para fora. Depois, desenhe uma linha de lápis na linha frontal do solvente. Seque-a com ar.
6. O cromatograma é colocado em um recipiente fechado (como outro béquer coberto com um vidro de relógio ou grandes recipientes de plástico) junto com alguns cristais de iodo. O vapor de iodo no recipiente reage com os pontos no cromatograma. As substâncias nas quais você está interessado podem aparecer como manchas coloridas. Trace-os com um lápis e desenhe pontos no centro de cada ponto.
Além disso, você pode usar uma lâmpada UV com comprimento de onda de 254 e 365 nm.
Como preparar a câmara de iodo.Erro comum: não faça uma grande mancha de gordura, pois sua substância pode se sobrepor a outras substâncias durante o experimento.
5. Quando as manchas de bases livres estiverem secas, a placa é colocada em uma camada rasa de solvente em um béquer coberto. É importante que o nível do solvente esteja abaixo da linha com a mancha. Aguarde até que a linha de frente do solvente atinja 4-5 mm antes da borda superior da placa e puxe-a para fora. Depois, desenhe uma linha de lápis na linha frontal do solvente. Seque-a com ar.
Pegue um frasco de plástico ou vidro, despeje 10-15 ml de água, 4-5 gotas de solução de álcool iodado. Mexa por 7 a 10 minutos. Escorra a água. O iodo é precipitado na água nas laterais do frasco. Coloque esse frasco em um recipiente.
Fator de retenção
Após a conclusão de uma separação, os compostos individuais aparecem como pontos separados verticalmente. Cada ponto tem um fator de retenção (Rf) que é igual à distância migrada sobre a distância total coberta pelo solvente. A fórmula do Rf é Rf= distância percorrida pela amostra/distância percorrida pelo solvente.
No experimento, obtive três pontos em vez dos quatro esperados. A repetição do experimento mostra que a cafeína não é eluída pela solução de cetato de etila: metanol: amônia 85:10:5. Aprovamos experimentalmente que essa solução é adequada para a eluição de drogas como anfetamina, metanfetamina e mefedrona.
Rf das drogas estudadas.
Anfetamina - 0,53Metanfetamina - 0,55
Mefedrona - 0,65
Explicação.
Tenho duas placas com resultados. Duas distâncias medidas entre o ponto inicial e o meio do ponto circundado. O ponto de anfetamina foi 42 na primeira placa e 49 mm na segunda placa a partir da linha de início, a linha frontal do solvente foi 85 e 86 mm, respectivamente. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Em seguida, calculei a média aritmética de 0,53. Os mesmos cálculos foram feitos para outras substâncias.
Tenho duas placas com resultados. Duas distâncias medidas entre o ponto inicial e o meio do ponto circundado. O ponto de anfetamina foi 42 na primeira placa e 49 mm na segunda placa a partir da linha de início, a linha frontal do solvente foi 85 e 86 mm, respectivamente. Rf1=42/85=0.49, Rf2=49/86=0.52. Em seguida, calculei a média aritmética de 0,53. Os mesmos cálculos foram feitos para outras substâncias.
Conclusão.
Como mostra o experimento, você pode medir o Rf do seu medicamento e comparar com uma substância conhecida em uma mesma placa. Faça uma mancha da base livre de sua droga e de 1 a 4 manchas de outras drogas para verificar o Rf. Se os pontos estiverem na mesma distância da linha inicial, provavelmente se trata da mesma substância. Além disso, se você obtiver vários pontos da sua droga, provavelmente há uma mistura de substâncias. Alguns medicamentos têm vários pontos porque são uma mistura de medicamento e subprodutos da síntese. No entanto, você pode compará-los com outros medicamentos usando a cromatografia de camada fina.
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